抗体纯化磁珠特征有哪些

发布时间:

2023/08/03 21:06

简单但不太稳定的磁珠表面共轭策略可以通过抗原或抗体直接被动吸附在"普通"磁珠的表面来实现。另外,如果抗原或抗体的共价连接对检测很重要,那么修改磁珠的表面化学成分是一个很好的选择。活性基团利用磁珠的大表面积,为你的抗体或抗原提供丰富的锚点,使之与磁珠共价连接。

首先需要获得含有目的蛋白的混合物,然后将一抗加入混合液中去识别目的蛋白,接着加入固定了/G或第二抗体的磁珠或琼脂糖颗粒,使抗原-抗体复合物附着在磁珠或琼脂糖上,充分洗涤磁珠,然后用酸或SDS溶出目的蛋白。

有几种类型的生物修饰磁珠。所选择的抗体或抗原可以用生物素连接物进行修饰,与用链霉素修饰的磁珠结合。蛋白A与大多数免疫球蛋白的Fc区结合,使其成为将抗体固定在磁珠上的有吸引力的选择。

现有化学发光磁珠抗体标记环节,需要活化、离心等步骤,造成操作复杂,重复性差等问题。发光试剂厂家都把磁珠标记抗体技术认定为公司保密技术,可见磁珠标记抗体技术还是存在很多的技术难度。

磁珠分选法B细胞基本原理是基于细胞表面目标抗原特异性抗体能与连接有磁珠的目标抗原相结合,在外加磁场中,能在磁场中停留,而无特异性抗体的细胞则不能停留,从而是细胞分离。该方法几分钟即可分离高纯度的细胞,但是由于磁珠影响细胞生物活性而不利于分离后培养与操作。

抗体的制备和标准品的制备:抗体的制备可采用两种方案,一种是将宿主细胞按照已定的生产工艺进行发酵和纯化,然后将获得的HCP蛋白免疫动物制备抗体;另一种方案是将工艺获得宿主细胞原液去除抗体后再免疫动物。标准品的制备可使用空载质粒转化到宿主细胞,按已定的生产工艺进行发酵纯化。

哺乳表达系统,能快速表达各种类型的抗体和重组蛋白。纯化的重组抗体内毒素含量低至0.1EU/ml,为抗体筛选及抗体药开发提供便捷的服务。

★操作步骤少:磁珠、样本、检测抗体共同加入进行孵育,减少洗涤;使用磁吸附,简单易行,减少离心操作,避免磁珠丢失;

多种蛋白表达制备系统(包括原核大肠杆菌表达系统和哺乳动物表达系统),配合先进的蛋白纯化系统,重组抗体标量可达500mg/L,抗体纯度可以达到95%以上,纯化工艺使抗体可溶性更好,活性保留更高。

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